A transformação de insetos em armas de guerra

Minúsculos e Poderosos

Nelson Aprobato Filho

No século 5 antes de Cristoum médico grego, Ctésias, ficou intrigado ao conhecer um novo, raro e caríssimo veneno. Quando começou a analisar o produto, nem sequer sabia se era proveniente do reino mineral, vegetal ou animal. O veneno havia entrado na Grécia como um presente, oferecido por um rei indiano. Acreditava-se que a misteriosa poção era produzida por um minúsculo pássaro, de cor alaranjada. E, para aguçar ainda mais as curiosidades, essa ave jamais havia sido vista ou capturada. Havia apenas a certeza de que uma pequena gota do produto poderia, em instantes, matar um homem.

Foi só no século 20 que entomologistas descobriram a procedência da poderosa toxina. Quem produzia o veneno era um besouro, menor do que uma uva e com muitas espécies originárias das florestas úmidas da Índia. O animal recebeu o nome científico de Paederus. Seu veneno foi classificado como mais poderoso do que o produzido pela viúva-negra, 15 vezes mais tóxico que o veneno das serpentes. Mais assustador, para nós humanos, é o fato de que algumas espécies desse inseto, ao contrário de aranhas e cobras, são capazes de voar.

Em estatística feita por Nigel E. Stork, entomologista do British Museum, de 1,82 milhão de espécies de animais e plantas oficialmente nomeadas, 57% são insetos. Há certas grandezas nesse fascinante mundo de minúsculas criaturas, como há, por outro lado, determinadas aproximações entre o ser humano e essa multidão de insetos, que são, ainda hoje, praticamente desconhecidas da maior parte das pessoas.

A história das relações entre o homem e insetos é milenar, rica em detalhes e aterrorizante em muitas de suas ramificações. Do uso desses animais como fonte de alimentação e entretenimento aos milhões investidos anualmente no controle de pragas agrícolas, o homem tem se interessado, por séculos, pelos insetos. Algumas dessas relações são estarrecedoras.

Coreia, 1952. No amanhecer do dia 27 de março um estranho objeto vermelho é lançado de um avião sobre a região de Liaoyang. Um morador que presencia a cena, assustado, sai de sua casa para verificar de que se trata. Nada encontrando nas proximidades da queda, mesmo inquieto desiste da busca e retorna à sua residência. Ao entrar, olha novamente para fora e fica perplexo com o que vê: do lado externo de uma das janelas centenas de insetos movimentam-se em alvoroço. Essa narrativa é absolutamente real, apesar de lembrar os melhores filmes de Alfred Hitchcock. Faz parte de um relatório feito por uma comissão científica internacional organizada com a finalidade de investigar fatos relativos à guerra biológica, durante a Guerra da Coreia (1950-1953).

O uso de insetos como armas de guerra talvez seja uma das mais nefastas e antigas formas de exploração humana sobre os animais. Jeffrey A. Lockwood, premiado entomologista, escritor e professor da Wyoming University, nos Estados Unidos, desvendou em profundidade essa longa e sinistra exploração. No livro Six-legged soldiers. Using insects as weapons of war (Oxford University Press, 2009) ele faz uma brilhante síntese de mais de 100 mil anos de história, do Paleolítico Superior aos dias atuais. A Guerra da Coreia é apenas um pequeno capítulo dessa longa história. O que chama a atenção na elegante análise de Lockwood é a capacidade de transmitir ao leitor o processo de aprimoramento das técnicas desenvolvidas para empregar insetos como poderosas armas de guerra: tanto para matar o inimigo por inoculação natural de venenos quanto para destruir plantações ou infectar reservatórios de água. Ou, ainda, como vetores para propagar doenças. Da pré-história ao Vietnã, passando por inúmeras guerras, Lockwood demonstra que o uso bélico de insetos acompanhou, da forma mais destrutível que se possa imaginar, grandes avanços da ciência e da tecnologia.

Durante a Segunda Guerra, por exemplo, países do Eixo, em suas estratégias para conter o avanço do exército soviético, iniciaram a produção em massa de pulgas infectadas com a peste bubônica. O plano original era criar em laboratório 5 bilhões de pulgas por ano, usando 300 mil ratos e centenas de prisioneiros de guerra como cobaias e fontes de  alimento. Depois de contaminados com o sangue dos ratos e dos prisioneiros os insetos seriam lançados contra o inimigo. Em contrapartida, países Aliados, em um único campo para a produção de armas biológicas, utilizaram aproximadamente 700 mil animais como cobaias, entre camundongos, porquinhos-da- índia, ratos, coelhos, hamsters, sapos, macacos, canários, cães, ovelhas, ferrets, gatos, porcos e galos. O número de insetos não foi computado. Com o fim da Segunda Guerra e durante a Guerra Fria as grandes potências assinaram acordos na tentativa de controlar a produção e o uso desse tipo de armamento. A preocupação cada vez mais se voltou para a defesa contra possíveis ataques.

O poder dos insetos continua inegável e o ser humano tem muito a aprender com essas formas de vida. No Brasil e no exterior, entomologistas que trabalham, por exemplo, com formigas e abelhas, têm demonstrado de maneira surpreendente que o respeito pelos insetos pode levar a descobertas inusitadas e, talvez, mais importante que isso, a formas mais harmoniosas de convivência. É algo para pensar, com muita seriedade.

Leucemia mielóide crônica e o sistema Fas-FasL

Chronic myeloid leukemia and the Fas-FasL system

Ana Paula F. Bergantini^I; Fabíola A. Castro^II; Ana M. Souza^II; Agnes C. Fett-Conte^III

^IMestranda do Curso de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto – Famerp
^IIProfa. Dra. do Departamento de Análises Clínicas, Toxicológicas e Bromatológicas da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo – USP
^IIIProfa. Dra. do Departamento de Análises Clínicas, Toxicológicas e Bromatológicas da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo – USP
^IVProfa. Adjunta do Departamento de Biologia Molecular da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto – Famerp

Correspondência para

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RESUMO

Com os avanços terapêuticos que incluem o mesilato de imatinibe, o transplante de medula óssea e a infusão de linfócito do doador, a perspectiva de vida dos portadores de leucemia mielóide crônica (LMC) tem aumentado significativamente e a doença pode não ser fatal. No entanto, os mecanismos biológicos que privilegiam a seleção das células hematopoéticas malignas sobre as células normais na LMC, responsáveis pelo insucesso terapêutico em muitos casos, ainda não estão totalmente esclarecidos. Alterações no processo de apoptose celular e escape das células leucêmicas à resposta imune antitumoral poderiam explicar, em parte, a vantagem seletiva dessas células. O processo de apoptose celular pode ser desencadeado pelas vias intrínseca ou extrínseca. A extrínseca é dependente da interação de receptores de morte celular, como a ligação do receptor Fas com seu receptor, o Fas ligante (FasL). A expressão diminuída de Fas e aumentada de FasL na célula leucêmica podem aumentar sua sobrevida tornando-a resistente à apoptose. Esse artigo descreve a relação entre LMC e o sistema Fas/FasL, sua possível importância no prognóstico e escape das células leucêmicas à resposta imune.

Palavras-chave: Leucemia mielóide crônica; sistema Fas/FasL; apoptose.

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ABSTRACT

With therapeutic advances that include imatinib mesylate, bone marrow transplantation and donor lymphocyte infusion, life expectancy of chronic myeloid leukemia carriers has increased significantly and the disease might not be fatal. However, the biological mechanisms that favor the selection of malignant clone cells over normal cells, in most cases responsible for the lack of therapeutic success, are still unclear. Alterations in cellular apoptosis process and escape of the leukemic cells from the anti-tumor immune response can explain, in part, the selective advantages of these cells. The apoptosis process or programmed cell death can be triggered by intrinsic or extrinsic pathways. The extrinsic is dependent on the interaction of cell death receptors, such as the Fas receptor and its agonist, the Fas ligand (FasL). A diminished expression of Fas and increased of FasL in leukemic cell may increase its survival, thereby making it resistant to apoptosis. This paper describes the relation between chronic myeloid leukemia and the Fas/FasL system and its possible importance in prognosis and in escape of the leukemic cells from the immune system.

Key words: Chronic myeloid leukemia; Fas/FasL system; apoptosis.

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Introdução

A leucemia mielóide crônica (LMC) foi descrita como forma independente de leucemia há 150 anos, em pacientes que morreram em conseqüência de intensa leucocitose e hepato-esplenomegalia.¹ É uma doença mieloproliferativa clonal das células pluripotentes da medula óssea e constitui 14% de todas as leucemias, com uma incidência anual de 1,6 casos por 100 mil indivíduos. É mais freqüente em adultos entre 40 e 60 anos de idade e afeta ambos os sexos, mas com predominância no sexo masculino.^2,3

A radiação ionizante em altas doses é o fator de risco mais associado ao surgimento da LMC, enquanto a participação de agentes químicos, biológicos e a predisposição genética, embora sugestivos, não parecem exercer muita influência no aparecimento da doença.^4,5

A progressão clínica da LMC pode ser dividida em três fases: crônica, acelerada e blástica. No início da fase crônica, que pode durar vários anos, a doença aparentemente é "benigna". Alguns pacientes são assintomáticos, mas outros apresentam fadiga, fraqueza, dores de cabeça, irritabilidade, febre, suor noturno e perda de peso. O diagnóstico é realizado pelos achados clínicos, citogenéticos e hematológicos do sangue periférico e medula óssea.^6,7

A fase acelerada surge após um período variável do diagnóstico, de poucos meses a vários anos, e caracteriza-se pelo aumento de blastos na medula óssea e no sangue periférico, leucocitose e basofilia no sangue periférico, anemia e trombocitopenia. Clinicamente, o paciente torna-se refratário ao tratamento empregado na fase crônica e pode apresentar progressão da hepato-esplenomegalia.

Posteriormente, a doença evolui para a fase blástica, definida hematologicamente pelo aumento de blastos leucêmicos (linfóides ou mielóides) no sangue periférico e/ou medula óssea (mais de 20%). Nesse estágio da doença, muitos pacientes evoluem para o óbito entre três e seis meses. A progressão para a fase acelerada e blástica parece estar associada, principalmente, à instabilidade genômica, o que predispõe ao aparecimento de outras anormalidades moleculares.^6,7

O tratamento da LMC pode ser realizado com hidroxiuréia, interferon-a (IFN-a), mesilato de imatinibe (Glivec®), transplante alogênico de medula óssea (TMO) e infusão de linfócito do doador (donor lymphocyte infusion - DLI) pós-recaída de TMO. A única modalidade terapêutica considerada curativa é o TMO, cujo sucesso depende de múltiplos fatores que incluem a idade, a fase da doença e a histo-compatibilidade entre o doador e o receptor.^7,8,9

Genética da LMC

A LMC está associada a uma alteração citogenética específica conhecida como cromossomo "Philadelphia" (Ph).^10,11 Embora observado em outras leucemias e até mesmo em condições neoplásicas não hematopoéticas, ele é reconhecido como marcador citogenético da LMC e sua detecção tem implicações no diagnóstico, prognóstico e na terapêutica da doença.^11,12 O cromossomo Ph resulta de uma translocação recíproca entre os braços longos dos cromossomos 9 e 22.¹³ Esta translocação t(9;22)(q34;q11) justapõe o oncogene abl (Abelson Leukemia Vírus), mapeado no cromossomo 9, ao gene bcr (Breakpoint Cluster Region), mapeado no 22. Em condições normais, o gene bcr codifica uma proteína com função relacionada à regulação do ciclo celular, enquanto o gene abl codifica uma proteína tirosina-quinase.^13,14 A proteína quimérica resultante da fusão bcr-ablapresenta uma atividade tirosina-quinase elevada, responsável pela patogênese da doença.¹⁵

O neogene bcr-abl é o responsável pelo processo molecular que determina a transformação da célula progenitora hematopoética normal em maligna. A célula leucêmica bcr-abl apresenta uma mieloproliferação contínua resultante, provavelmente, de três mecanismos principais: alteração da adesão das células progenitoras às células estromais e à matriz extracelular,¹⁶ manutenção de um sinal mitogênico constante¹⁷ e resistência à apoptose celular.¹⁸ A tirosina-quinase Bcr-abl confere à célula leucêmica uma alta resistência à morte celular independentemente do agente indutor deste processo.¹⁹ Contudo, estes mecanismos de resistência, que favorecem o crescimento e a vantagem proliferativa das células com o cromossomo Ph em relação às células normais, não foram totalmente elucidados.

Sistema Fas-FasL e o Processo de Morte Celular Programada

A apoptose, processo fisiológico de morte celular programada, desempenha um papel relevante na homeostase de diferentes tecidos, inclusive, do sistema hematopoético. Esse processo é caracterizado por diversas alterações morfológicas e bioquímicas das células e é de crucial importância para o desenvolvimento embrionário, maturação do sistema imune, defesa contra infecções virais e eliminação de tumores.^20,21,22 Pode ser deflagrado por estímulos externos por meio da ativação de receptores específicos presentes na superfície celular (via extrínseca ou via receptor de morte celular), chamados receptores da morte, ou pelo estresse intracelular (via intrínseca ou mitocondrial).²³ Essas vias culminam com a ativação de proteases conhecidas como caspases executoras.²⁴ O processo é regulado por inúmeros fatores inibidores e ativadores. Entre os inibidores estão algumas proteínas da família Bcl-2 (bcl-2, bcl-x_L, mcl-1, a1 e bcl-w) e da família IAP (inhibitor of apoptosis protein). Entre os ativadores estão o Fas, o DR4, o DR5, interferon-gama e outras proteínas membros da família Bcl-2 (bad, bak, bax, harakiri e boK).²⁵ O sistema Fas-FasL é constituído pelo receptor Fas (APO-1 ou CD95) e seu ligante, FasL, membros da família do fator de necrose tumoral (TNF).^26,27,28

Enquanto Fas é expresso na maioria das células do organismo, seu ligante FasL é observado nas membranas das células citotóxicas da resposta imune, hepatócitos, em linfócitos T ativados e em células oculares. A apoptose via Fas-FasL é desencadeada pela interação entre Fas e FasL. Quando ela ocorre, os receptores formam agregados que, na forma de trímeros, ligam-se à proteína adaptadora FADD (Fas-associated death domain) presente no citoplasma. Ocorre, então, a ligação dessas moléculas à pró-caspase-8, resultando na formação de um complexo denominado DISC (Death Inducing Signalling Complex), que culmina na auto-clivagem e ativação da caspase-8. A caspase-8 pode, assim, diretamente ou pela via mitocondrial, ativar a caspase-3 efetora, o que resulta na apoptose celular.^23,29,30 O recrutamento e ativação da pró-caspase-8 são regulados por proteínas anti-apoptóticas, como o v-FLIP (FADD-like ICE inhibitory proteins) and c-FLIP. Essas proteínas competem com a caspase-8 pelo sítio de ligação do complexo Fas-FADD e inibem a apoptose celular.³¹

Por outro lado, na presença de sinais de estresse intracelular, como exposição à radiação ultravioleta, quimioterápicos, infecções, alterações metabólicas e redução de fatores de crescimento, ocorre a migração de proteínas pró-apoptóticas (bax e bid) do citoplasma para a mitocôndria, alterando sua permeabilidade e permitindo a liberação de outras proteínas pró-apoptóticas, como o citocromo C, o fator indutor de apoptose (AIF), DNAses e pró-caspases 2 e 9. O citocromo C se liga a uma proteína adaptadora (apaf-1), ativando as caspases e culminando na apoptose pela via mitocondrial, que também é regulada por proteínas da família Bcl-2 24. As vias de morte e mitocondrial estão apresentadas na Figura 1.

Fas-FasL e o Processo Neoplásico

A deficiência e a exacerbação do sistema Fas-FasL já foram associados ao aparecimento de tumores, doenças auto-imunes e destruição tecidual. O descontrole do processo de apoptose devido à exacerbação parece estar relacionado com a etiopatogênese de algumas doenças hematológicas, como a síndrome mielodisplásica e a anemia aplástica grave.^32,33 A deficiência já foi associada com a LMC e com leucemias linfóides.³⁴

O efeito da redução do processo de apoptose celular em tumores foi descrita inicialmente em células de linfomas foliculares, as quais apresentavam uma expressão aumentada do oncogene bcl-2. Posteriormente, foram descritas alterações na expressão de proteínas pró e antiapoptóticas em diferentes neoplasias hematológicas.³⁵ Por exemplo, o antígeno FasL, que fisiologicamente é expresso nas células efetoras da resposta imune (RI), já foi observado na superfície de diferentes tipos de neoplasias, inclusive em leucemias. Essas células neoplásicas podem se ligar aos linfócitos T ou células natural killer (NK) ativadas, que expressam o antígeno Fas, e conduzi-los à apoptose, resultando na inativação da RI antitumoral.^36,37

A expressão aumentada do FasL em células leucêmicas constitui, portanto, um dos mecanismos de escape dos clones malignos à RI antitumoral e à ação de drogas quimioterápicas.^33,37,38

Mais recentemente foi descrita uma molécula solúvel também relacionada à apoptose celular, a DcR3, secretada por diferentes tipos de células tumorais e capaz de se ligar ao FasL, bloqueando sua interação com Fas. A apoptose, nesse caso, também é inibida, e as células malignas podem escapar da RI mediada pelas células efetoras que expressam o FasL.³⁹

Outro fato interessante é que células leucêmicas secretam antígeno FasL solúvel (sFasL) capaz de promover a apoptose de células efetoras, impedindo que estas atuem na erradicação do clone maligno. Assim, o ligante FasL solúvel pode induzir a apoptose das células efetoras, como citado anteriormente, e diminuir o pool circulante de células da resposta imune.^37,40-43

A expressão simultânea do receptor Fas e seu ligante Fas-L em linfócitos maduros ativados por células neoplásicas pode, ainda, representar um mecanismo de autolimitação da RI. Nesse contexto, o antígeno Fas e a proteína bcl-2 são expressos de maneira equilibrada nos leucócitos normais, porém, parece que, em leucemias, esta expressão se altera.^44,45

Alguns autores demonstraram, inclusive, que a expressão de proteínas anti e pró-apoptóticas constituem marcadores prognósticos, pois a maioria das drogas quimioterápicas citotóxicas e imunoterápicas atuam potencializando a apoptose celular pela via mitocondrial ou pelo aumento da expressão dos receptores de morte celular. Assim, por exemplo, as concentrações de sFas e sFasL seriam um parâmetro útil na determinação do prognóstico da leucemia e da resistência aos quimioterápicos.^46,47,48

Sistema Fas-FasL e Terapêutica na LMC

Na LMC, as células precursoras hematopoéticas malignas são mais resistentes à apoptose do que as células normais, devido à expressão da proteína tirosina-quinase bcr-abl, que prolonga a sobrevida da célula 50. Esta proteína exerce sua capacidade antiapoptótica pelo aumento da expressão da proteína bcl-xL 49 e pela diminuição do Fas nas células malignas precursoras.⁵¹

Estudos quantitativos da expressão de bcl-2 e bad em células mononucleares de portadores de LMC mostraram que essas proteínas estão expressas em níveis mais altos nesses pacientes do que em células de indivíduos normais. Esses mesmos estudos demonstraram que a detecção dessas proteínas teria importância para determinação do prognóstico do doente com LMC52. A expressão da proteína bcl-2 parece aumentar com a progressão da doença, o que reforça a hipótese de que, quando expressa em níveis altos, prolongaria a sobrevida da célula leucêmica, tornando-a resistente à apoptose. O antígeno Fas, por sua vez, parece estar expresso em níveis normais ou diminuídos nas células mononucleares na LMC na fase crônica, o que conferiria maior resistência dessas células à apoptose, bem como às drogas quimio e imunoterápicas.^19,53

Pacientes portadores de LMC, como citado anteriormente, podem ser tratados com hidroxiuréia, IFN-a, IFN-aassociado à citarabina, mesilato de imatinibe (Glivec®), TMO e DLI na recaída da doença pós-TMO.

A hidroxiuréia é um agente citostático paliativo, que promove o controle da proliferação celular pela inibição da síntese do DNA e que parece não apresentar efeito sobre a via extrínseca da apoptose celular mas, como todo quimioterápico, é capaz de induzir a apoptose celular por meio do estresse celular e da ativação da via intrínseca (mitocondrial). Já o IFN-a parece exercer um efeito imunomodulatório e anti-proliferativo importante sobre as células mononucleares e precursoras (CD34⁺) dos pacientes portadores de LMC. Parece restaurar o número de células da resposta imune circulante, promover a ativação de células efetoras (T CD8 e NK) e estimular as células efetoras (T CD8, T CD4 e NK) a secretarem citocinas de padrão Th1 (IL-2 e IFN-g). Todavia, seu efeito não se restringe apenas à ativação celular; o IFN-a potencializa a apoptose das células CD34⁺, por meio da elevação do número de células efetoras circulantes no sangue periférico que expressam o antígeno FasL (CD56/FasL e T CD8/FasL⁺) e do aumento da susceptibilidade da célula CD34+ à apoptose (aumento do número de células CD34/Fas⁺).^54,55

O IFN-a possui um papel chave no impedimento do escape do clone maligno à resposta imune, exercendo-o por meio de dois mecanismos de ação complementares, a citorredução (antiproliferativa e potencialização da apoptose) e a capacidade de potencializar a resposta imune, mediada pelas células T e NK.^54,55 Associado com a citarabina, aumenta significantemente a resposta citogenética e a sobrevida dos pacientes. A citarabina também é um agente citostático capaz de potencializar a apoptose celular pela via intrínseca, mas não há evidências na literatura de que seja capaz de modular a expressão dos antígenos Fas e FasL.⁵⁷

O mesilato de imatinibe na LMC age como um inibidor da tirosina quinase bcr-abl, que bloqueia diferentes vias de sinalização celular que estavam ativadas por esta proteína. Parece modular diferentes proteínas anti e pró-apoptóticas pertencentes às vias extrínseca e intrínseca da apoptose celular. Sozinho ou associado a diferentes drogas, como, por exemplo, o IFN-a, in vitro parece ser capaz de aumentar a expressão do antígeno FasL nas células leucêmicas e restaurar sua expressão nas células efetoras da resposta imune (T e NK). O aumento da expressão de FasL nas células leucêmicas parece contribuir para a deflagração do mecanismo autócrino de ativação da via extrínseca da apoptose e conduzir a célula à morte. Por outro lado, as células efetoras citotóxicas passariam a exercer sua função normal e contribuir para uma resposta imune antileucêmica mais efetiva.⁵⁸

Outras drogas para o tratamento da LMC têm sido descritas na literatura e entre elas está o inibidor da tirosina-quinase BMS-354825 e os inibidores da farnesil-transferase. Seus efeitos nas vias de apoptose celular ainda não foram totalmente elucidados, contudo, os dados relatados na literatura sugerem que os inibidores da farnesil-transferase não são capazes de modular a expressão dos antígenos Fas e FasL.⁵⁹

O TMO visa a erradicação dos clones malignos dos pacientes e a restauração da sua hematopoese normal por meio da infusão de células-tronco da medula óssea de um doador normal. Nesse contexto, é extremamente importante que ocorra a reação do enxerto contra a leucemia (graft-versus-leukemia effect- GVL), ou seja, uma resposta imune das células imunocompetentes do doador contra as células leucêmicas do receptor. Parece que a apoptose das células leucêmicas provocada pela citotoxicidade mediada pelas células T e NK via Fas-FasL não é fundamental no GVL, mas sim na doença do enxerto contra o hospedeiro (graft-versus-host-disease, GVHD). Neste caso, o aumento da expressão desses antígenos exerceria um efeito deletério ao paciente.^60,61

Outra terapia que visa a ocorrência do efeito GVL em pacientes portadores de LMC é a DLI. A DLI é capaz de induzir a remissão hematológica e citogenética na maioria dos pacientes portadores de LMC que recaíram pós-TMO. Parece não modular a expressão dos antígenos Fas e FasL nas células mononucleares dos pacientes com LMC; então, a remissão hematológica e citogenética desses pacientes pós-DLI não deve estar associada ao aumento da expressão dos antígenos FasL e Fas, mas à potencialização da resposta imune antileucêmica.⁶²

Conclusão

Uma vez que as células leucêmicas podem ser erradicadas pela potencialização da apoptose celular via inibição da bcr-abl ou citotoxicidade celular via Fas-FasL, os estudos desses mecanismos parecem ser de grande importância para a terapia e prognóstico dos pacientes, inclusive, para a seleção daqueles indicados para a imunoterapia.

Os resultados obtidos a partir desses estudos podem auxiliar na compreensão dos eventos biológicos relacionados à etiopatogenia, progressão e resposta terapêutica. A elucidação desses mecanismos possibilitaria, inclusive, a modulação das drogas e imunoterapias utilizadas no tratamento da LMC, tornando-as mais efetivas.

Referências Bibliográficas

1. Henderson ES, Lister TA, Greaves MF. Leukemia. Philadelphia: W.B. Saunders; 1996. P. 619.        [ Links ]

2. Kantarjian HM, Giles FJ, O'brien SM, Talpaz M. Clinical course and therapy of chronic myelogenous leukemia with interferon-alpha and chemotherapy. Hematol Oncol Clin North Am 1999;12:31-80.        [ Links ]

3. Chopra R, Pu QQ, Elefanty AG. Biology of BCR-ABL. Blood 1999;13:211-29.        [ Links ]

4. Doll R, Smith PG. The long term effects of X radiation in patients treated for metrophatia haemorrhagica. Br J Radiol 1968;41:362-68.        [ Links ]

5. Lee SJ. Chronic myelogenous Leukaemia. Br J Haematol 2000;111:993-1009.        [ Links ]

6. Faderl S, Talpaz M, Estrov Z, Kantarjian, H. Chronic myelogenous leukemia: biology and therapy. Ann Intern Med 1999;131:207-19.        [ Links ]

7. Sawyers CL. Chronic Myeloid Leukemia. N Engl J Med 1999;340:1.330-40.        [ Links ]

8. Giles FJ, Kantarjian H, Cortes J. Novel therapies for patients with chronic myeloid leukemia. Exp Rev Anticancer 2004;4(2):271-82.        [ Links ]

9. O'Brien SG, Guilhot F, Larson RA. Imatinib compared with interferon and low dose cytarabine for newly diagnosed chronic-phase in myeloid leukemia. N Engl J Med 2003;349:1.421-30.        [ Links ]

10. Nowell PC, Hungerford DA. A minute chromosome in human chronic granulocytic leukemia. Science 1960;132:1.497-98.        [ Links ]

11. Melo JV, Hughes TP, Apperley JF. Chronic Myeloid Leukemia. Hematology 2003;132-52.        [ Links ]

12. Kabarowski JHS, Witte ON. Consequences of BCR-ABL expression within the hematopoietic stem cell in chronic myeloid leukemia. Stem Cells 2000;18:399-408.        [ Links ]

13. Rowley JD. Letter: a new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukaemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining. Nature 1970;243:290-93.        [ Links ]

14. Kalidas M, Kantarjian H, Talpaz M. Chronic Myelogenous Leukemia. American Medical Association 2001;286:895-98.        [ Links ]

15. Westermann J, Schlimper C, Ritcher G, et al. T cell recognition lf bcr/abl in healthy donors and in patients with chronic myeloid leukemia. Br J Hematol 2004;125(2):213-6.        [ Links ]

16. Gordon MY, Dowling CR, Ridley GP, et al. Altered adhesive interactions with marrow stroma of hematopoietic progenitor cells in chronic myeloid leukemia. Nature 1987;328:342-44.        [ Links ]

17. Puil L, Liu J, Gish G. Bcr-abl oncoproteins bind directly to activators of the Ras signaling pathway. EMBO J 1994;13:764-73.        [ Links ]

18. Bedi A, Zehnbauer BA, Barber JP, et al. Inhibition of apoptosis by BCR-ABL in chronic myeloid leukemia. Blood 1999;83:2.038-44.        [ Links ]

19. Ravandi F, Kantarjian HM, Talpaz M, et al. Expression of apoptosis proteins in chronic myelogenous leukemia: associations and significance. Cancer 2001;91:1964-72.        [ Links ]

20. Kerr JFR, Wyllie AH, Currie AR. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br J Cancer 1972;36:239-57.        [ Links ]

21. Wyllie AH, Kerr JFR, Currie AR. Cell death: the significance of apoptosis. Int Rev Cytol 1980;68:251-306.        [ Links ]

22. Maurillo L, Poeta GD, Venditti A, et al. Quantitative analysis of Fas and bcl-2 expression in hematopoietic precursors. Haematologica 2001;86:237-43.        [ Links ]

23. Thorbum A. Death receptor-induced cell killing. Cellular Signaling 2004;16:139-44.        [ Links ]

24. Parolin MB, Reosan IJM. Apoptose como mecanismo de lesão nas doenças hepatobiliares. Arq Gastroenterol 2001;38(2):138-144.        [ Links ]

25. Hale AJ, Smith CA, Sutherland LC, et al. Apoptosis: molecular regulation of cell death. Eur J Biochem 1996;236:1-26.        [ Links ]

26. Suda T, Takahashi T, Golstein P, Nagata S. Molecular cloning and expression of the Fas ligand, a novel member of the tumor necrosis factor family. Cell 1993;75:1169-7.        [ Links ]

27. Polaki V, Mitsiades CS, Mitsiades N. The role of Fas and FasL as mediators of anticancer chemotherapy. Drug Resist Update 2001;4:233-42.        [ Links ]

28. Wood CM, Goodman PA, Vassilev AD, Uckun FM. CD95(APO-1/FAS) deficiency in infant acute lymphoblastic leukemia: detection of novel soluble Fas splice variants. Eur J Haematol 2003;70(3):156-71.        [ Links ]

29. Pinkoski MJ, Green DR. Fas ligand, death gene. Cell Death Differ 1999;6:1.174-81.        [ Links ]

30. Patel T. Apoptosis in hepatic pathophysiology. Clin Liver Dis 2000;4:295-317.        [ Links ]

31. Scaffidi C, Schmitz I, Krammer PH, Peter MC. The role of c-FLIP in modulation of CD95-induced apoptosis. J Biol Chem 1999;274(3):1541-8.        [ Links ]

32. Ramenghi U, Bonissoni S, Migliaretti G et al. Deficiency of the Fas apoptosis pathway without Fas gene mutations is a familial trait predisposing to development of autoimmune diseases and cancer. Blood 2000;95:3176-82.        [ Links ]

33. Debatin KM, Stahnke K, Fulda S. Apoptosis in hematological disorders. Seminars Cancer Biol 2003;13:149-158.        [ Links ]

34. Wickremasinghe RG, Hoffbrand AV. Biochemical and genetic control of apoptosis relevance to normal and hematological malignancies. Blood 2001;98:3541-43.        [ Links ]

35. Tsujimoto Y, Finger LR, Yunis J, et al. Cloning of the chromosome breakpoint of neoplastic B cells with the t(14;18) chromosome translocation. Science 1984;226:1097-99.        [ Links ]

36. Nagata S. Fas ligand and immune evasion. Nat Med 1996;2:1.306-7.        [ Links ]

37. Buzyn A, Petit F, Ostankovitch M, et al. Membrane-bound Fas (APO-1/CD95) ligand on leukemic cells: a mechanisms of tumor immune escape in leukemia patients. Blood 1999;94:3.135-140.        [ Links ]

38. Zeytun A, Hassunch M, Nagarkatti M, Nagarkatti P. Fas-FasL ligand-based interactions between tumor cells and tumor specific cytotoxic T lymphocytes: a lethal two-way street. Blood 1997;90:1952-59.        [ Links ]

39. Takahama Y, Yamada Y, Emoto K, et al. The prognostic significance of over-expression the decoy receptor for Fas ligand (DcR3)in patients with gastric carcinomas. Gastric Cancer 2002;5:61-68.        [ Links ]

40. Lickliter JD, Kratzke, RA, Nguyen PL, et al. Fas ligand is highly expressed in acute leukemia and during the transformation of chronic myeloid leukemia to blast crisis. Exp Hematol 1999;27:1519-27.        [ Links ]

41. Dhein J, Walczac H, Baumler C, et al. Autocrine T cell suicide mediated by APO-1 (Fas/CD95). Nature 1995;73:438-41.        [ Links ]

42. Kamihira S, Yamada, Y. Soluble Fas(APO-1/CD95) isoform in adult T-cell leukemia. Leuk Lymphoma 2001;41:169-76.        [ Links ]

43. Urbaniak-Kujda D, Jazweic B, Tomaszewska-Toponska B, et al. Expression of Fas receptor and soluble Fas ligand (sFasL) concentration in acute leukemia. Po Arch Med Wewn 2002;108(3):873-85.        [ Links ]

44. Molica S, Mannella A, Dattilo A et al. Differential expression of Bcl-2 oncoprotein and Fas antigen on normal peripheral blood and leukemic bone marrow cells. A flow cytometric analysis. Haematologica 1996;81:302-9.        [ Links ]

45. Groneberg C, Pickartz T, Binder A, et al. Clinical relevance of CD95 (Fas/Apo-1) on T cells of patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia. Exp Hematol 2003;31(8):682-5.        [ Links ]

46. Osorio LM, Aguillar-Satelises M, De Santiago A et al. Increased serum levels of soluble Fas in progressive B-CLL. Eur J Haematol 2001;66:342-6.        [ Links ]

47. Kitada S, Andersen J, Akar S, et al. Expression of apoptosis-regulating proteins in chronic lymphocytic leukemia: correlations with in vitro and in vivo chemo responses. Blood 1998;91:3.379-3.389.        [ Links ]

48. Silvestris F, Williams RC, Calvani N, et al. Serum elevations of soluble Fas(CD95/apo-1) concur in deregulating T cell Apoptosis during active lupus disease. Clin Exp 2002;2:13-27.        [ Links ]

49. Amarante-Mendes GP, Mcgahon AJ. Bcl-2- independent Bcr-Abl- mediated resistance to apoptosis protection is correlated with up regulation of Bcl-xL. Oncogene 1998;16:1.383-90.        [ Links ]

50. Deininger MWN, Goldman JM, Melo, JV. The molecular biology of chronic myeloid leukemia. Blood 2000;96:3343-56.        [ Links ]

51. Sanches-Garcia I, Martin-Zanca D. Regulation of Bcl-2 gene expression by BCR-ABL is mediated by RAS. J Mol Biol 1997;267:225-28.        [ Links ]

52. Brady HJ. Apoptosis and leukemia. Br J Haematol 2003;123(4):577-85.        [ Links ]

53. Handa H, Hegde UP, Kotelnikov VM, et al. Bcl-2 and C-MYC expression, cell cycle kinetics and apoptosis during the progression of chronic myelogenous leukemia from diagnosis to blastic phase. Leuk Res 1997;21:479-89.        [ Links ]

54. Selleri C, Maciejewski JP, Pane F, et al. Fas-Mediated modulation of Bcr/Abl in chronic myelogenous leukemia results in differential effects on apoptosis. Blood 1998;92:981-89.        [ Links ]

55. Castro FA, Palma PVB, Marais FR, et al. Immunological effects of Interferon-Alpha in Chronic Myelogenous Leukemia. Leuk Lymphoma 2003;44:2061-67.        [ Links ]

56. Voutsadakis IA. Interferon-alpha and pathogenesis of myelo-proliferative disorders. Med Oncol 2000;17:249-57.        [ Links ]

57. Guilhot F, Chastang C, Michallet M, et al. Interferon Alfa-2b combined with cytarabine versus interferon alone in chronic myelogenous leukemia. French Chronic Myeloid Leukemia Study Group. N Engl J Med 1997;337(4):223-9.        [ Links ]

58. Yin T, Wu Y-L, Sun H-P, et al. Combined effects of As4S4 and imatinib on chronic myeloid leukemia cells and BCR-ABL oncoprotein. Blood 2004;104:4.219-25.        [ Links ]

59. Selleri C, Maciejewski JP, Montuori N, et al. Involvement of nitric oxide in farnesyltransferase inhibitor-mediated apoptosis in chronic myeloid leukemia cells. Blood 2003;102:1490-97.        [ Links ]

60. Castro FA, Palma PVB, Morais FR, Voltarelli JC. Fas/FasL-Ligand Expression on lymphocytes subsets in chronic myelogenous leukemia patients after allogeneic bone marrow transplantation. Rev Bras Hematol Hemoter 2003;25(2):159.        [ Links ]

61. Silver RT, Woolf SH, Hehlmann R, et al. An evidence-based analysis of the effect of busulfan, hydroxyurea, interferon and allogeneic bone marrow transplantation in treating the chronic phase of chronic myeloid leukemia: developed for the American society of hematology. Blood 1999;94:1.517-36.        [ Links ]

62. Castro FA, Palma PVB, Morais FR, Voltarelli JC. Immunological effects of donor lymphocyte infusion for in patients with chronic myelogenous leukemia relapsing after bone marrow transplantation. Braz J Med Res 2004;37(2):201-6.        [ Links ]

 Correspondência para:
Agnes Cristina Fett-Conte
Serviço de Genética – Hospital de Base (Famerp/Funfarme)
Av. Brigadeiro Faria Lima, 5544
15090-000 – São José do Rio Preto - SP
E-mail: genetica@famerp.br

Informações toxicológicas de alguns fitoterápicos utilizados no Brasil

Toxicological information of some herbal medicines used in Brazil

Monica Silva dos Reis Turolla; Elizabeth de Souza Nascimento^*

Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo

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RESUMO

As plantas medicinais vêm sendo utilizadas com finalidades terapêuticas há milhares de anos. Seu uso popular foi propagado de geração em geração e descrito nas diversas farmacopéias. A partir do desenvolvimento da química orgânica, tornou-se possível obter substâncias puras através do isolamento de princípios ativos de plantas, entre elas, a digoxina e a morfina, resultando em desinteresse pela pesquisa de substâncias de origem vegetal. Entretanto, a partir da década de 1980, foram desenvolvidos novos métodos de isolamento de substâncias ativas, tornando-se possível identificar substâncias em amostras complexas como os extratos vegetais, ressurgindo o interesse por compostos de origem vegetal que pudessem ser utilizados como protótipos para o desenvolvimento de novos fármacos. Atualmente, apesar da crescente importância dos medicamentos fitoterápicos, relativamente poucos estudos foram realizados a fim de comprovar sua eficácia e segurança, sendo que muitas plantas ainda são utilizadas com base somente no seu uso popular bem estabelecido. O objetivo deste trabalho foi avaliar, junto aos principais bancos de dados e fontes públicas de informação, a disponibilidade de dados de toxicidade pré-clínica de dez plantas medicinais comercializadas na forma de medicamentos fitoterápicos no Brasil,. Observou-se que há poucos dados sobre a toxicidade pré-clínica das dez plantas pesquisadas, mas, de maneira geral, os experimentos em animais demonstraram baixa toxicidade aguda, subaguda e crônica e não mostraram atividades mutagênicas ou teratogênicas.

Unitermos: Informações toxicológicas. Medicamentos fitoterápicos. Plantas medicinais. Toxicidade pré-clínica.

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ABSTRACT

Herbal medicines have been used with therapeutical purposes for thousands of years. Its popular use has been transmitted across generations and is described in the pharmacopeas. Since the development of organic chemistry, it became possible to obtain pure substances by isolating active substances from plants, among them, digoxine and morphine, resulting in lack of interest for research of substances originated from vegetals. However, from the 1980's onwards, new methods for isolating active substances were developed and it became possible to identify substances in complex samples such as vegetal extracts, restoring the interest for vegetally-originated compounds that could be used as prototypes for the development of new drugs. Nowadays, in spite of the growing importance of herbal medicines, relatively few studies have been performed to prove efficacy and safety, while many plants are still used on the basis of popular well-established use. The objective of this paper is to assess the availability of pre-clinical toxicity data for ten medicinal plants marketed as herbal medicines in Brazil, in major databases and public sources of information. Few data were found regarding pre-clinical toxicity on the ten medicinal plants surveyed, but, in general, experiments in animals showed low acute, sub-acute and chronical toxicity and did not show mutagenic or teratogenic toxicity.

Uniterms: Toxicological information. Herbal medicines. Medicinal plants. Pre-clinical toxicity.

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INTRODUÇÃO

Há milhares de anos, o homem vem utilizando os recursos da flora no tratamento de diversas patologias. Há relatos, por exemplo, do uso de plantas com finalidades terapêuticas por volta de 3.000 a.C. na obra Pen Ts'ao do chinês Shen Nung (Ko, 1999; Tyler, 1996). No ano 78 d.C., o botânico grego Pedanios Dioscorides descreveu cerca de 600 plantas medicinais, além de produtos minerais e animais no tratado De Materia Medica. Este tratado permaneceu como fonte de referência por mais de catorze séculos (Robbers, Speedie, Tyler, 1996; Tyler, 1996). Foi através da observação e da experimentação pelos povos primitivos que as propriedades terapêuticas de determinadas plantas foram sendo descobertas e propagadas de geração em geração, fazendo parte da cultura popular.

No século XVI, o médico suíço Philippus Aureolus Theophrastus Bombastus von Hohenheim, conhecido como Paracelsus (1493-1541), formulou a "Teoria das Assinaturas", baseada no provérbio latim similia similibus curantur, "semelhante cura semelhante". Com esta teoria acreditava-se que a forma, a cor, o sabor e o odor das plantas estavam relacionados com as suas propriedades terapêuticas, podendo dar indícios de seu uso clínico. Algumas destas plantas passaram a fazer parte das farmacopéias alopáticas e homeopáticas a partir do século XIX, quando se começou a investigar suas bases terapêuticas (Elvin-Lewis, 2001).

O isolamento da morfina da Papaver somniferum em 1803 pelo farmacêutico Friedrich Wilhelm Adam Sertürner, marcou o início do processo de extração de princípios ativos de plantas. A partir de então, outras substâncias foram isoladas, como por exemplo, a quinina e a quinidina obtidas da Cinchona spp, em 1819, e a atropina daAtropa belladona, em 1831, que passaram a ser utilizadas em substituição aos extratos vegetais (Schulz, Hänsel, Tyler, 2001; Tyler 1996).

Assim, a produção de fármacos via síntese química, o crescimento do poder econômico das indústrias farmacêuticas e a ausência de comprovações científicas de eficácia das substâncias de origem vegetal aliada às dificuldades de controle químico, físico-químico, farmacológico e toxicológico dos extratos vegetais até então utilizados, impulsionaram a substituição destes por fármacos sintéticos (Rates, 2001).

Após a década de 1960, observou-se, então, um desinteresse da indústria farmacêutica e dos institutos de pesquisa pela busca de novas substâncias de origem vegetal, por se acreditar que já haviam sido isoladas as principais substâncias ativas das drogas vegetais conhecidas, bem como já haviam sido realizadas todas as possíveis modificações químicas de interesse destas substâncias (Schenckel, Gosman, Petrovick, 2000).

Entretanto, a partir dos anos 1980, os avanços técnicos e o desenvolvimento de novos métodos de isolamento de substâncias ativas a partir de fontes naturais, permitiram maior rapidez na identificação de substâncias em amostras complexas como os extratos vegetais, ressurgindo o interesse pela pesquisa destas substâncias como protótipos para o desenvolvimento de novos fármacos.

Assim, mesmo com o desenvolvimento de grandes laboratórios farmacêuticos e dos fármacos sintéticos, as plantas medicinais permaneceram como forma alternativa de tratamento em várias partes do mundo. Observou-se nas últimas décadas a revalorização do emprego de preparações fitoterápicas. Assim, alguns grupos farmacêuticos passaram a desenvolver esforços voltados para o aprimoramento de medicamentos fitoterápicos e sua produção em escala industrial. O novo avanço dos medicamentos fitoterápicos, longe de ser volta ao passado, caracteriza-se pela busca de produção em escala industrial, diferentemente das formas artesanais que caracterizaram os estágios iniciais de sua utilização.

Atualmente, os fitoterápicos são amplamente utilizados em diversos países. Na África, por exemplo, 80% da população depende do uso destes medicamentos, os quais representam alternativa frente ao alto custo dos fármacos sintéticos. O mercado mundial de medicamentos fitoterápicos é de US$ 43 bilhões por ano. Somente nos Estados Unidos da América, este mercado representa US$ 5 bilhões por ano, sendo o setor de mais rápido crescimento no mercado farmacêutico norte-americano (Aschwanden, 2001). Estima-se que cerca de 60% dos fármacos com atividades antitumorais e antimicrobianas, já comercializados ou em fase de pesquisa clínica, sejam de origem natural (Shu, 1998).

As plantas medicinais desempenham, portanto, papel muito importante na medicina moderna. Primeiramente porque podem fornecer fármacos extremamente importantes, os quais dificilmente seriam obtidos via síntese química, como por exemplo, os alcalóides da Papaver somniferum e os glicosídeos cardiotônicos da Digitalis spp. Em segundo lugar, as fontes naturais fornecem compostos que podem ser levemente modificados, tornando-os mais eficazes ou menos tóxicos. Em terceiro lugar, os produtos naturais podem ser utilizados como protótipos para obtenção de fármacos com atividades terapêuticas semelhantes a dos compostos originais (Robbers, Speedie, Tyler, 1996).

Diante da grande importância dos medicamentos fitoterápicos, vários países da Europa estão intensificando esforços para unificar a legislação referente aos medicamentos fitoterápicos, amplamente comercializados nestes países (em especial na Alemanha e França). Por outro lado, nos Estados Unidos, as preparações à base de plantas são classificadas como suplementos nutricionais, não sendo necessário submeter dados de segurança e eficácia ao Food and Drug Administration (FDA) para a comercialização destes produtos.

No Brasil, a legislação para medicamentos fitoterápicos vem sofrendo modificações nos últimos anos. A Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) vem elaborando normas para a regulamentação destes medicamentos, desde a Portaria n. 6 de 1995, que estabeleceu prazos para que as indústrias farmacêuticas apresentassem dados de eficácia e segurança dos medicamentos fitoterápicos, passando pela RDC n. 17 de 2000, e a Resolução RDC n. 48 de 16 de março de 2004, atualmente em vigor, que dispõe sobre o registro de medicamentos fitoterápicos.

Esta preocupação das autoridades regulatórias com a normatização dos medicamentos fitoterápicos propicia a avaliação de aspectos importantes, como a eficácia e segurança do uso destes medicamentos. O uso tradicional de diversas plantas medicinais baseado em conhecimentos populares, aliado à crença de que, por ser natural não causa reações adversas, fez com que poucas plantas medicinais fossem avaliadas através de estudos pré-clínicos e clínicos, a fim de comprovar sua eficácia e segurança.

Além disto, sabe-se que muitas plantas medicinais apresentam substâncias que podem desencadear reações adversas, seja por seus próprios componentes, seja pela presença de contaminantes ou adulterantes presentes nas preparações fitoterápicas, exigindo um rigoroso controle de qualidade desde o cultivo, coleta da planta, extração de seus constituintes, até a elaboração do medicamento final.

Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar as informações sobre a toxicidade pré-clínica de dez plantas medicinais comercializadas como medicamentos fitoterápicos no Brasil junto aos principais bancos de dados e fontes públicas de informação.

MATERIAL E MÉTODO

Material

Para este estudo, foram selecionadas dez plantas medicinais comercializadas na forma de medicamentos fitoterápicos, os quais apresentaram volume de vendas e número de unidades vendidas significativos entre os anos de 1999 e 2002, segundo informações da IMS Health. As plantas selecionadas são as seguintes:

1. Passiflora incarnata L.
2. Ginkgo biloba L.
3. Aesculus hippocastanum L.
4. Plantago ovata Forsk.
5. Panax ginseng C. A Meyer
6. Piper methysticum G. Forst.
7. Valeriana officinalis L.
8. Hypericum perforatum L.
9. Cimicifuga racemosa (L.) Nutt.
10. Rhamnus purshiana D.C.

Método

As dez plantas medicinais selecionadas foram avaliadas quanto aos aspectos toxicológicos nas bases de dados e fontes de referência disponíveis, apresentadas na Tabela I.

RESULTADOS

As Figuras 1 e 2 destacam, respectivamente, a evolução do volume de vendas e o faturamento dos medicamentos fitoterápicos à base das dez plantas medicinais selecionadas, no período 1999-2002.

As Tabelas II a XI apresentam informações toxicológicas obtidas junto às fontes de informações pesquisadas para as dez plantas selecionadas.

DISCUSSÃO

Para as dez plantas selecionadas neste trabalho, foram avaliadas as informações com relação à toxicidade aguda, subaguda e crônica, mutagenicidade e teratogenicidade em importantes fontes de informação, como The Complete German Commission E Monographs (Blumenthal, 1998); WHO Monographs on Selected Medicinal Plants(WHO, 1999 e 2002); Monographs on the medicinal Uses of Plant Drugs (ESCOP, 1999). Observamos, por exemplo, que, para Piper methysticum, as três fontes listadas acima não indicam quaisquer dados sobre estudos de toxicidade aguda, subaguda e crônica, o mesmo ocorrendo com Hypericum perforatum e Cimicifuga racemosa, embora as demais bases pesquisadas apresentem algumas informações.

Para Passiflora incarnata, a disponibilidade de informações sobre sua toxicidade é limitada e apoiada no seu uso bem-estabelecido na medicina tradicional, conforme a base de dados Thomson MICROMEDEX. Apesar dessa relativa escassez, uma das referências (Fisher, Purcell, Le Couteur, 2000) relata eventos adversos cardiovasculares e gastrintestinais após seu uso em doses terapêuticas por uma mulher jovem, os quais poderiam estar relacionados aos alcalóides e flavonóides presentes na formulação. A Passiflora incarnata é utilizada em combinação com Valeriana officinalis e Melissa officinalis, chamado "Chá Sedativo", aprovado na Alemanha pela Comissão "E".

Já com relação a Ginkgo biloba, mais de 400 estudos foram conduzidos com os extratos padronizados de suas folhas nos últimos 30 anos e somente os extratos padronizados comprovam os efeitos terapêuticos estudados. Outras formas de utilização, como as folhas frescas, ou os extratos em baixas concentrações, não produzem os efeitos desejados (Blumenthal, 2000). O primeiro extrato desenvolvido foi o EGb 761, por W.Schwabe Co., na Alemanha, o qual foi intensivamente estudado quanto aos aspectos químicos, farmacológicos e toxicológicos. Os ginkgolídeos, em especial o ginkgolídeo B, podem agir como um potente inibidor do fator ativador de plaquetas e seu uso crônico pode estar associado com o aumento no tempo de sangramento e com o risco de hemorragia espontânea. Glicosídeos cianogênicos podem ser encontrados na planta, mas sua atividade biológica não foi estudada (WHO, 1999). As sementes, caules e folhas contém 4'-O-metilpiroxidina, que causa sintomas de deficiência da vitamina B₆, incluindo convulsões (Mils, Bone, 2000).

Outras plantas também foram avaliadas em estudos clínicos. Em grande estudo com indivíduos expostos a 8 espécies do gênero Aesculus, 3099 casos foram analisados de 1985 a 1994. Cerca de 50% das exposições ocorreram com crianças entre 0 e 5 anos de idade: em 77% (2374) dos casos não foram detectados quaisquer efeitos tóxicos; em 11,5% (356) dos casos ocorreram efeitos mínimos a moderados. Nos demais 11,5% (359) dos casos, os efeitos foram classificados como toxicidade potencialmente desconhecida. Matyunas et al. (1997) concluíram que a maioria das exposições não resultou em efeitos tóxicos; nenhuma toxicidade grave foi relatada segundo dados de Thomson MICROMEDEX.

As fibras de Plantago ovata são também utilizadas há muito tempo na medicina tradicional na Ásia, Europa e América do Norte. O grande risco associado ao seu uso está na ingestão insuficiente de líquidos com o medicamento, o que pode causar obstrução esofágica especialmente em pessoas idosas, que apresentam motilidade gastrintestinal prejudicada, segundo dados de Thomsom MICROMEDEX.

Outra planta utilizada tradicionalmente é o Panax ginseng, usada extensivamente pela Medicina Tradicional Chinesa na forma de chás e outras formas líquidas ou sólidas prescritas por acupunturistas e médicos naturalistas. A administração crônica de Panax ginseng foi associada à ocorrência de sangramento vaginal, mastalgia, alteração do estado mental. Também foi relatada síndrome de abuso por ingestão crônica de Panax ginseng, podendo ocorrer hipertensão, nervosismo, insônia, erupções cutâneas e diarréia matinal segundo Thomsom MICROMEDEX.

Em relação ao Hypericum perforatum, foram relatados efeitos adversos importantes. Nas bases de dados WHO Monographs e ESCOP há artigos que descrevem a fototoxicidade da hipericina, um dos principais constituintes com atividade antidepressiva. Em estudos com animais foi observada reação de fotossensibilidade em bovinos, ovinos e eqüinos, principalmente os de pele mais clara, após a ingestão de grandes quantidades de Hypericum perforatum (cerca de trinta vezes a dose preconizada em humanos). Em estudos clínicos também foi demonstrada fotossensibilidade em indivíduos sensíveis que foram expostos a radiações ultravioleta A e B.

Com relação ao Piper methysticum, seu uso foi relatado desde 1768, tendo sido utilizado em rituais das comunidades das ilhas do Pacífico Sul na forma de bebida, a qual causava sensação adstringente e sedativa, seguido por relaxamento, com diminuição da fadiga e ansiedade. Há relatos de que o consumo excessivo desta bebida em doses elevadas por essas comunidades resultou em má nutrição, perda de peso, disfunções hepáticas e renais, entre outros. Entretanto, não se sabe ao certo se estes efeitos foram provocados somente pelo Piper methysticum, ou se foram potencializados pelo álcool (Mills, Bone, 2000).

Como foi observado nas referências pesquisadas, o uso tradicional das plantas medicinais não garante a segurança do medicamento fitoterápico, sendo necessário realizar ensaios pré-clínicos e clínicos. Os testes para avaliação de toxicidade das substâncias químicas estão bem detalhados segundo os protocolos sugeridos pela OECD (1996). No Brasil, a Resolução RDC n. 48 e a Resolução - RE n. 90, publicadas em 16 de março de 2004, tratam do registro dos medicamentos fitoterápicos e apresentam um guia para a realização de estudos de toxicidade pré-clínica de fitoterápicos, respectivamente. A resolução RE n. 90 foi elaborada em conformidade com as normas da Organização Mundial de Saúde (OMS), e recomenda estudos de toxicidade aguda e de doses repetidas.

Com relação ao estudo de toxicidade de doses repetidas, a OMS e a RE n. 90 de 2004 sugerem a utilização de pelo menos duas espécies roedoras e não-roedoras, sendo porém o período de administração do produto nos animais baseado no período proposto para a utilização terapêutica da substância, diferentemente das normas da OECD, que especificam o período de administração em 28 e 90 dias para espécies roedoras e 90 dias para espécies não-roedoras. Além disto, nem a OMS e nem a RE n. 90 de 2004, informam a concentração máxima da substância-teste que pode ser administrada nos ensaios de toxicidade aguda e de doses repetidas.

Além dos ensaios de toxicidade aguda e de doses repetidas, a RE n. 90 de 2004 também sugere estudos de genotoxicidade, quando houver indicação de uso contínuo ou prolongado do medicamento em humanos, e a avaliação toxicológica de fitoterápicos de uso tópico, porém não detalha os métodos para a realização destes testes. Assim, levando-se em consideração o estágio de desenvolvimento que já foi atingido pelos protocolos da OECD, os quais especificam somente os testes de toxicidade para substâncias químicas, ainda há dificuldades em se estabelecer os testes mais adequados para os fitoterápicos, principalmente diante da dificuldade de padronização das preparações fitoterápicas.

Apesar dos avanços já conquistados, a regulamentação dos medicamentos fitoterápicos permanece como uma questão em aberto, mesmo entre os países da União Européia, em especial na Alemanha e na França onde os fitoterápicos são mais comercializados. Enquanto toda a legislação para os medicamentos de fármacos sintéticos encontra-se bem estabelecida, os medicamentos fitoterápicos ainda carecem de maior esforço regulatório.

Em contrapartida, os Estados Unidos consideram os medicamentos fitoterápicos como suplementos nutricionais, não sendo necessário submeter dados de segurança e eficácia ao FDA para sua comercialização. Assim, o grande problema com relação aos suplementos nutricionais é que não há controle de qualidade destes produtos, logo não há como provar que as substâncias e as quantidades declaradas nos rótulos estão presentes, bem como não há controle sobre outras substâncias como fármacos sintéticos ou outros contaminantes, que podem estar presentes na formulação, os quais podem resultar em interações indesejáveis.

CONCLUSÕES

A pesquisa apresentada neste trabalho mostrou que poucos dados sobre a toxicidade pré-clínica das dez plantas avaliadas estão descritos nas fontes de informações utilizadas. As monografias da Organização Mundial da Saúde e da Comissão "E" contemplam as dez plantas avaliadas, porém apresentam poucos dados sobre as informações pesquisadas. De maneira geral, os experimentos em animais revelam baixa toxicidade aguda, subaguda e crônica, bem como não demonstraram atividade mutagênica ou teratogênica para as dez plantas avaliadas.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

ASCHWANDEN, C. Herbs for health, but how safe are they? Bull. W. H. O., Geneva, v.79, n.7, p.691-692, 2001. Disponível em: http://www.who.int/bulletin. Acesso em: 09 jan. 04.        [ Links ]

BLUMENTHAL, M., ed. Herbal medicine: expanded commission E monographs. Newton: Integrative Medicine Communication/American Botanical Council, 2000. 519p.        [ Links ]

BLUMENTHAL, M.; BUSSE, W.R.; KLEIN, S., eds. The complete German Commission E monographs: therapeutic guides to herbal medicines. Austin: American Botanical Council, 1998. 685p.        [ Links ]

BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Legislação. Sistema de Legislação em Vigilância Sanitária (VISALEIS). Resolução RDC n. 48 de 16 de março de 2004. Disponível em: http://e-legis.bvs.br/leisref/public/search.php. Acesso em: 25 jun. 2004.        [ Links ]

BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Legislação. Sistema de Legislação em Vigilância Sanitária (VISALEIS). Resolução RE n. 90 de 16 de março de 2004. Disponível em: http://e-legis.bvs.br/leisref/public/search.php. Acesso em: 25 jun. 2004.        [ Links ]

BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Consultas Públicas. Áreas de Atuação. Medicamentos. Legislação. Resoluções. Resolução - RDC nº. 17 de 24 de fevereiro de 2000. Disponível emhttp://www.anvisa.gov.br/medicamentos/legis/resol.htm . Acesso em 24 jan 2004.        [ Links ]

ELVIN-LEWIS, Memory. Should we be concerned about herbal medicines? J. Ethnopharmacol., Amsterdam, v.75, p.141-164, 2001.        [ Links ]

EUROPEAN SCIENTIFIC COOPERATIVE ON PHYTOTHERAPY. Monographs on the medicinal uses of plant drugs. Exeter: ESCOP, 1996. 1v.        [ Links ]

FISHER, A.A.; PURCELL, P.; LE COUTEUR, D.G. Toxicity of Passiflora incarnata L. Clin. Toxicol., New York, v.38, n.1, p.63-66, 2000.        [ Links ]

IMS HEALTH. Intercontinental Marketing Services. Company Information. Disponível em: www.imshealth.com. Acesso em: 30 abr. 2005.         [ Links ]

KO, R.J. Causes, epidemiology, and clinical evaluation of suspected herbal poisoning. Clin. Toxicol., New York, v.37, n.6, p.697-708, 1999.         [ Links ]

MATYUNAS, N.; KRENZELOK, E.; JACOBSEN, T.; et al. Horse chestnut (aesculus spp.) ingestion in the United States: 1985-1994. J. Toxicol. - Clinical Toxicol., v.35, p. 527, 1997.         [ Links ]

MILLS, S., BONE, K. Principals and practice of phytotherapy: modern herbal medicine. Edinburgh, Londres: Churchill Livingstone, 2000. 643p.         [ Links ]

OECD - ORGANIZATION FOR ECONOMIC CO-OPERATION AND DEVELOPMENT. OECD guidelines for testing of chemicals. Paris: OECD, 1996.         [ Links ]

RATES, S.M.K. Plants as source of drugs. Toxicon, Amsterdam, v.39, p.603-613, 2001.         [ Links ]

ROBBERS, J.E.; SPEEDIE, M.K.; TYLER, V.E. Pharmacognosy and pharmacobiotechnology. Baltimore: Willians & Wilkins, 1996. p.1-14.         [ Links ]

SCHENKEL, E.P.; GOSMANN, G.; PETROVICK, P.R. Produtos de origem vegetal e o desenvolvimento de medicamentos. In: SIMÕES, C.M.O.; SCHENKEL, E.P.; GOSMANN, G.M.; MELLO, J.C.P.; MENTZ, L.A.; PETROVICK, P.R., orgs. Farmacognosia: da planta ao medicamento. 2.ed. Florianópolis. UFSC; Porto Alegre: UFRGS, 2000. cap.15, p.291-320.         [ Links ]

SCHULZ, V.; HÄNSEL, R.; TYLER, V.E. Medicinal plants, phytomedicines, and phytotherapy. In: _____. Rational phytotherapy: a physician's guide to herbal medicine. 4.ed. New York, Berlin: Springer, 2001. cap.1, p.1-39.        [ Links ]

SHU, Y.-Z. Recent natural products based drug development: a pharmaceutical industry perspective. J. Nat. Prod., Columbus, v.61, p.1053-1071, 1998.         [ Links ]

TUROLLA, M. S. R. Avaliação dos aspectos toxicológicos dos fitoterápicos: um estudo comparativo. São Paulo, 2004. 131 p. (Dissertação de Mestrado. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Universidade de São Paulo).        [ Links ]

TYLER, V.E. Natural products and medicine: an overview. In: BALICK, M.J.; ELISABETSKY, E.; LAIRD, S.A., eds.Medicinal resources of the tropical forest, biodiversity and its importance to human health. New York: Columbia University Press, 1996. p.3-10. (Biology and resource management series).         [ Links ]

WORLD HEALTH ORGANIZATION. WHO monographs on selected medicinal plants. Geneva: Organização Mundial de Saúde, 1999. 2v.        [ Links ]

Recebido para publicação em 04 de maio de 2005.
Aceito para publicação em 24 de novembro de 2005.

* Correspondência: E.S. Nascimento
Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas
Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade de São Paulo
Av Lineu Prestes, 580, bloco 13B
05389-970 - São Paulo, SP - Brasil
E-mail: esnasci@usp.br